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*组化染色

1. 石蜡切片，步骤同前。切片经贴片后，60℃烤片30min使蜡熔化，经二甲本Ⅰ、Ⅱ各10min，脱蜡。然后，将切片放入**、95%、90%、80%、70%中3-5min，再放入蒸馏水中3min，水化。

2．脱蜡和水化后，用PBS(pH7.4，具体看所用抗1体及染色试剂说明)冲洗3次，每次3分钟。洗瓶冲洗。

3. 根据抗1体的要求，对组织抗原进行相应的修复。可选步骤，具体见抗1体说明书。

4.每张切片加1滴或50μl 3%过1氧化，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS冲洗3次，每次3分钟。此步骤是对内源性过氧化物酶含量高的组织而言。

4. 除去PBS液，每张切片加1滴或50μl的*1抗1体，室温下孵育60分钟或4℃过夜，具体参见每种抗1体的说明书。PBS冲洗3次，每次3分钟。

 (1) 称取5mgHRP溶解于1ml蒸馏水中。1 U0 |) i L/ Y/ ?. ]

      (2) 于上液中加入0.2ml新配的0.1M NaIO4溶液，室温下避光搅拌20分钟。: |+ }% L' N7 ?4 e2 g

      (3) 将上述溶液装入透析袋中，对1mM PH4.4的醋1酸缓冲液透析，4℃过夜。

  (4) 加20μl 0.2M PH9.5碳酸盐缓冲液，使以上醛化桯RP的PH升高到9.0~9.5，然后立即加入10mg IgG(抗1体，或SPA5mg)在1ml 0.01M碳酸盐缓冲液中，室温避光轻轻搅拌2小时。9 U# ^& ~. [7 @

      (5) 加0.1ml新配的4mg／ml NaBH4液，混匀，再置4℃2小时。# B+ T' n; v7 C' F* H5 }

      (6) 将上述液装入透析袋中，人elisa试剂盒价格，对0.15M PH7.4 PBS透析，4℃过夜。0 m# a# G5 V# x， S7 p， B

　　其余步骤(纯化)同戊二1醛标记步骤的(6)、(7)、(8)。

3）结果判定：

　　除标记物IgG量的计算，略有不同以外，其余均同戊二1醛法。5 {% ^% U/ T  X- Z0 U- a

　　IgG量(mg／ml)＝(OD280nm-OD403nm×0.3)×0.62( Q: p$ f' X， F0 }; s

4）试剂及器材:1 x- R+ T/ e$ i' Q

      (1) 0.1M NaIO4：称取241mg高碘1酸(广州化学试剂厂，批号830602)溶于蒸馏水10ml中。

  (2) 1mM PH4.4醋1酸缓冲液:  ?. p' ﹨5 N) ?( K

　　    0.2M NaAc (1.361克／50ml) 3.7ml+ r% g; o& m2 r7 t4 O

　　    0.2M HAc (0.601ml／50ml) 6.3ml

　    　加蒸馏水至2，000ml。

  (3) 0.2M PH9.5碳酸盐缓冲液:3 ?! ﹨$ z* p7 ]' g& X. E) z( f

　　　　　　　Na２CO３ 0.32克; s3 C. i! A5 q1 G/ w4 {

　　　　　　　NaHCO３ 0.586克: H% E  M! O w- M

　　　　　　　加蒸馏水至50ml

　　再用蒸馏水作20倍稀释，即成0.01M PH9.5的碳酸盐缓冲液。

  (4) NaBH４溶液(4mg／ml):

　　临用时称取NaBH４4mg溶于1ml蒸馏水中。+ h( i* [6 J， H% T

      (5) 其它的试剂及器材可参见戊二1醛标记法。

*测定技术的基础在于抗原抗1体之间的特异结合反应，所以任何优质的诊断1试剂离不开优质的原料，如抗原抗1体，酶等。以前用于*测定的抗原通常为各种纯化抗原，而抗1体则为纯化抗原*动物后获得的多克1隆抗1体和使用杂交瘤技术得到的单克1隆抗1体，而抗原或抗1体的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来，随着分子生物学的发展，使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或抗1体及其酶结合物等*测定试剂几成为现实的新一代试剂，各种新型使用的测定方法也不断出现。