武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、*学试剂盒、生化试剂、ELISA试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的高品质产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、*学等生命科学领域。
17.脱水Ⅱ
将切片放入95%中洗去多余的红色,然后放入无水中3-5min。最后用吸水纸吸干多余的。
18.透明
切片放入二甲本Ⅰ、Ⅱ中各5min。
二甲本应尽量保持无水,8-OHdG ELISA试剂盒,应经常更换,或用纱布包无水1酸铜放入染色缸内吸收水分。切片如在二甲本中出现白雾现象,说明脱水未尽,应退回中重新脱水,否则切片难以镜检。
19.封藏:中性树胶封存
因切片经二甲本透明,使用中性树胶作为封藏剂,树胶可用二甲本稀释至合适的稠度。
武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、*学试剂盒、生化试剂、ELISA试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的高品质产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、*学等生命科学领域。
1. ELISA的原理
ELISA的基础是抗原或抗1体的固相化及抗原或抗1体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗1体仍保持其*学活性,酶标记的抗原或抗1体既保留其*学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗1体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗1体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗1体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗1体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了*反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。
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1、染色过强 原因 解决办法 抗1体的浓度过高或抗1体孵育时间过长 降低抗1体滴度(一般指浓缩性抗1体)抗1体孵育时间:室温1 小时或4℃过夜 孵育温度过高,孵育温度**过37℃ 一般室温20-28℃ DAB 显色时间过长或 DAB 浓度过高 显色时间不能**过5-10分钟,以显微镜下观察为准 2、非特异性背景染色 原因 解决办法 操作过程中冲洗不充分 每步冲洗3×5 组织中含过氧化物酶未阻断 可再配置新鲜3%H2O2封闭,孵育时间延长 组织中含内源性生物素 正常非*动物血1清再封闭 血1清蛋白封闭不充分 延长血1清蛋白封闭时间